(资料图)
1、那时用的方法叫做双脱氧终止法,也叫做sanger法.它的原理是在DNA合成过程中,DNA聚合酶能够使用ddNTP(双脱氧核苷酸)来作为原料,但它的反应会在加入ddNTP的时候终止.具体实验是通过PCR来完成的,但与普通PCR不同,它只需要一个引物而不是一对.在4个相同的反应体系中分别加入普通的dNTP以及4种不同的ddNTP(比如体系1里面缺少dATP,而有ddATP,以此类推).假设四个体系中分别加入的是ddATP,ddGTP,ddCTP和ddGTP我们就分别把这个叫做A,G,C,T体系,然后每个体系中,会在遇到相应碱基的时候停止反应,这样就产生了一系列长度不一并且分别在以A,G,C,T时终止的DNA片段,比如A体系中的DNA片段,都是以A结尾的DNA .接着我们拿着这些片段去进行一个高分辨率的电泳(能够区分出一个碱基的差别),然后根据电泳结果,我们就能读出序列了.。
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